整理匯總比較熱門(mén)的人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基。

MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

——廣泛使用的幾種人間充干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)一開(kāi)始使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基（DMEM，DMEM-F12等）配比牛血清的*培養(yǎng)基，因?yàn)榕Ｑ遄鳛楫愒次铮赡軙?huì)帶來(lái)病原體污染，此后有使用人血清、血小板裂解液和臍帶血清等作為替代，雖然也不能*免除威脅。血清和這些替代品還有一個(gè)缺點(diǎn)，都是天然產(chǎn)物，批次間并不穩(wěn)定，不利于研究和臨床應(yīng)用所需的一致性。

隨著臍帶華通氏膠MSC等各種間充質(zhì)干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細(xì)胞能大量獲得，MSC治療發(fā)展后，培養(yǎng)基批次穩(wěn)定、沒(méi)有污染是必要條件，商用的無(wú)血清培養(yǎng)基因而成為*選擇。

StemPro® MSC SFM無(wú)血清間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品英文名稱(chēng)： CTS™ StemPro™ MSC SFM

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：StemPro™無(wú)血清間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

Gibco CTS™ StemPro™間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是無(wú)血清培養(yǎng)基，專(zhuān)為人間充質(zhì)干細(xì)胞設(shè)計(jì)，相對(duì)于傳統(tǒng)的血清培養(yǎng)基，能顯著增強(qiáng)人間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增和一致性。使用該培養(yǎng)基人間充質(zhì)干細(xì)胞可以擴(kuò)展到5個(gè)形態(tài)，同時(shí)仍然保持他們的三系中胚層分化潛能(即:可分化成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞)。每一批培養(yǎng)基用人間充質(zhì)干細(xì)胞測(cè)試都合格；而且用血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的人間充質(zhì)干細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到StemPro™無(wú)血清間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，不需要或者只需要很短的適應(yīng)期。此外，該培養(yǎng)基還可以可以直接培養(yǎng)人類(lèi)骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞。

MesenCult™人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品英文名稱(chēng)： MesenCult™-XF Medium，Defined, xeno-free medium for human mesenchymal stem cells

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：MesenCult™人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品概述 MesenCult™-XF培養(yǎng)基是一款標(biāo)準(zhǔn)的，無(wú)異種成份，無(wú)血清培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)用于人間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）培養(yǎng)。MesenCult™-XF Medium優(yōu)化用于體外擴(kuò)增間充質(zhì)干細(xì)胞和使用集落形成單位-成纖維細(xì)胞（CFU-F）的細(xì)胞計(jì)數(shù)。MesenCult™-XF支持MSCs細(xì)胞長(zhǎng)期生長(zhǎng)和維護(hù)細(xì)胞多分化潛能。MesenCult™-XF Medium要與MesenCult™-XF Attachment Medium（#05424）和MesenCult™-ACF Dissociation Kit （#05426）一起使用。MesenCult™-XF Attachment Substrate 和 MesenCult™-ACF Dissociation Kit培養(yǎng)基成份經(jīng)過(guò)篩分測(cè)試，在與MesenCult™-XF Medium一起使用時(shí)可提供*細(xì)胞貼附。MesenCult™-XF Medium使用時(shí)必需添加L-谷氨酰胺。

推薦應(yīng)用：

• 人骨髓中分離的間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞增殖

• 間充質(zhì)干細(xì)胞的長(zhǎng)期培養(yǎng)（8代以上）

• 人骨髓分離的CFU-F和培養(yǎng)擴(kuò)增的間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞檢測(cè)和計(jì)數(shù)

MesenGro人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品英文名稱(chēng)： StemRD MesenGro® Chemically Defined Medium for MSC

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：StemRD人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

StemRD人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基用于從骨髓、臍帶血或脂肪組織中提取的人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)。StemRD人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的原料來(lái)源是化學(xué)重組合成和純化得到。StemRD人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是無(wú)異源性的因?yàn)闆](méi)有一種成分直接來(lái)自于非人類(lèi)動(dòng)物。

Lonza MSCGM-CD™  BulletKit 間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品英文名稱(chēng)： TheraPEAK Chemically Defined Mesenchymal Stem Cell Growth Medium

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

Lonza MSCGM-CD™ 人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是無(wú)血清培養(yǎng)基，專(zhuān)為人間充質(zhì)干細(xì)胞設(shè)計(jì)，相對(duì)于傳統(tǒng)的血清培養(yǎng)基，能顯著增強(qiáng)人間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增和一致性。使用該培養(yǎng)基人間充質(zhì)干細(xì)胞可以擴(kuò)展到5個(gè)形態(tài)，同時(shí)仍然保持他們的三系中胚層分化潛能(即:可分化成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞)。此外，該培養(yǎng)基還可以可以直接培養(yǎng)人類(lèi)骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞。

LONZA 還有一款適合多種細(xì)胞類(lèi)型的通用型無(wú)血清培養(yǎng)基，用來(lái)培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞市場(chǎng)反饋較好。

LONZA UltraCULTURE^TM Serum-free Medium是一種通用型無(wú)血清培養(yǎng)基，適用于培養(yǎng)貼壁和懸浮的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。適于在疫苗生產(chǎn)中制備病毒顆粒；支持雜交瘤形成時(shí)的細(xì)胞融合，支持單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞系的細(xì)胞生長(zhǎng)。適合多種細(xì)胞類(lèi)型的無(wú)血清培養(yǎng)，包括HeLa、HEC、N-10、HNK、MB231等細(xì)胞。

Stemgro®  hMSC Mediu人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品英文名稱(chēng)： Corning® stemgro® hMSC Medium

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：康寧人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

Corning® Stemgro®是一種無(wú)血清、無(wú)異種蛋白、化學(xué)成分明確的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。

更多間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品歡迎您咨詢(xún)重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司。重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司以“專(zhuān)注干細(xì)胞研究，提升干細(xì)胞品質(zhì)”為發(fā)展理念，專(zhuān)業(yè)從事干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用研究及干細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。

推薦 HY StemCell 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

中文名：HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

英文名：HY STEMCELL CCGmHuM^TM  Human MSCs Growth Medium

華雅干細(xì)胞開(kāi)發(fā)的HY StemCell CCGmHum^TM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是成分確定、無(wú)血清、無(wú)動(dòng)物源，無(wú)需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)擴(kuò)增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。細(xì)胞因子添加物中含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、粘附蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

附錄 三種zui熱門(mén)人間充質(zhì)干細(xì)無(wú)血清培養(yǎng)基的比較StemPro MSC SFM MesenCult MSCGM-CD

1 StemPro MSC SFM 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

是間充質(zhì)干細(xì)胞的*種商用無(wú)血清培養(yǎng)基，而且已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)作為醫(yī)療產(chǎn)品使用。

StemPro " MSC SFM"谷歌學(xué)術(shù)有250多篇。

“bone marrow”來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞有200多篇。

“Adipose”脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞有近200篇。

“umbilical cord”臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞有近150篇。

2 StemCell MesenCult 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

標(biāo)準(zhǔn)、無(wú)異源、無(wú)血清培養(yǎng)基，人間充質(zhì)干細(xì)胞。

適用：骨髓來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞

CFU-F 分析

谷歌學(xué)術(shù) Mesencult-XF有160多篇，2017有20多篇。

Mesencult有1000多篇。

Mesencult-XF+

骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞 近140篇

脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞 約100篇

臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞 約100篇

3 LONZA TheraPEAK™ MSCGM-CD™ 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

基本特點(diǎn)：無(wú)血清，成分確定，各種類(lèi)型的間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)。

另外聲稱(chēng)細(xì)胞從有血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)出來(lái)可以直接換LONZA的，不需要額外馴化。

MSCGM-CD是 Mesenchymal Stem Cell Growth Medium，Chemically Defined的縮寫(xiě)，是LONZA的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的特定品牌。

用MSCGM-CD在谷歌學(xué)術(shù)上能搜到約100篇文獻(xiàn)。2017年就有20多篇。

再看下間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源三大幫各有多少篇：

骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞 約80篇

脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞 約60篇

臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞 約60篇

過(guò)程中發(fā)現(xiàn)牙周膜間充質(zhì)干細(xì)胞也蠻多的，有40多篇。

背景知識(shí) 不同來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的分離及血清培養(yǎng)

人間充質(zhì)干細(xì)胞的不同來(lái)源

人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

1 人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

密度梯度離心骨髓，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll密度梯度離心

人類(lèi)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

Knock out DMEM，DMEM+10%FBS

2 新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

組織塊培養(yǎng)法、密度梯度離心法等處理臍帶、臍帶血，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll-Hypaque 密度梯度離心，酶消化法（0.25% 胰蛋白酶-EDTA），組織塊培養(yǎng)法

新生兒臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞 新生兒臍帶血來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM+10%FBS，10%FCS，MSCGM+10%FCS

3人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

組織塊培養(yǎng)法、酶消化法處理華通氏膠，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

組織塊培養(yǎng)法, 酶消化法 (0.1% 膠原酶II,1 mg/ml 膠原酶B+胰蛋白酶, 膠原酶 +hyaluronidase +胰蛋白酶,胰蛋白酶-EDTA, 0.26% 膠原酶I+ 0.07% hyaluronidase+0.125% 胰蛋白酶)

人類(lèi)臍帶華通氏膠來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM/DMEM-F12 + 10% FBS

4 人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理脂肪組織，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶消化法(1.5 mg/ml 膠原酶 I, 1 mg/ml 膠原酶-I in 0.1% BSA)

人類(lèi)脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM-Low Glucose+MCDB201+ 2% FCS,DMEM+ 20% FBS,MesenproRS

5 人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

密度梯度離心、酶消化法處理羊水，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

密度梯度離心,酶消化法 (0.25% 胰蛋白酶 +1.2 units/ml of dispase + 2 mg/ml 膠原酶I）

人類(lèi)羊水來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

a-MEM + 20% FBS, DMEMF12 + 10% FBS, high glucose DMEM + 20% hESC-defined FBS, KSR-based 培養(yǎng)基

6 人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理牙髓，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶法 (387.1 U/+mg 膠原酶+ 0.70 U/mg dispase II)

人類(lèi)牙髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

D-MEM-F12, a-MEM + 2% FCS

7 人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理皮膚組織，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶消化法 (0.6 U/ml dispase, 0.62 Wunsch U/ml Liberase Blendzyme 1,1.25 mg/ml 膠原酶 I)

人類(lèi)皮膚來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM-F12 1 10/5/0.5% FBS, DMEM + 20% FBS

8 新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

Ficoll 密度梯度離心、酶消化法處理胎盤(pán)，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll 密度梯度離心, 酶消化法(1 mg/ml Dispase, 300 U/ml 膠原酶, 100 U/ml Hyalluronidase,

80 U/ml DNAse I, 0.25% 胰蛋白酶-EDTA)

新生兒胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM 低糖 + 20% FBS

9 人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

酶消化法處理唾液腺，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

酶消化 (1.67 mg/ml 膠原酶+ 1.33 mg/ml hyaluronidase, 1.67 mg/ml dispase; 5.01 mg/ml 膠原酶2 + 3.99 mg/ml hyaluronidase,33.4 mg/ml dispase)

人類(lèi)唾液腺來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

DMEM + 10% FCS, DMEMF12 + 3% FBS

10 人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞

Ficoll–Paque 密度梯度離心、酶消化法處理滑膜，貼壁法原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞分離

Ficoll–Paque 密度梯度離心, 酶消化法 (3mg/ml 膠原酶V)

人類(lèi)滑膜來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)

a-MEM + 10% FBS, 20% FBS

小結(jié)：

不同來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的分離方法：Ficoll–Paque 密度梯度離心、酶消化法、組織塊培養(yǎng)法

不同來(lái)源的人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法：不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配比不同比例的胎牛血清。

名詞解釋

MSC SFM mesenchymal stem cell serum-free medium，間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

Ficoll密度梯度離心 常用來(lái)分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，平均分子量為400,000，當(dāng)密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過(guò)生物膜。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。Ficoll-Paque 分離液適用血液、骨髓和臍帶血來(lái)源的人單個(gè)核細(xì)胞分離（包括間充質(zhì)干細(xì)胞）。

DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可用于支持很多種類(lèi)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。

組織塊培養(yǎng)法 組織切成小塊，接種培養(yǎng)器皿培養(yǎng)細(xì)胞。

酶消化法 用胰蛋白酶和膠原酶等消化組織塊，分離細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

膠原酶 是一種蛋白酶，它能夠特異性的結(jié)合 Pro-X-Glyc-Pro序列中，中性氨基酸（X）和甘氨酸之間的肽鍵。該序列高頻率的存在于膠原中。膠原酶是*的一種可以降解廣泛存在于結(jié)締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶。

Hyaluronidase 透明質(zhì)酸酶

Dispase 分散酶

DNAse 脫氧核糖核酸酶

相關(guān)產(chǎn)品

Ficoll 密度梯度分離液 Ficoll-Paque PREMIUM改良于Ficoll-Paque PLUS，后者作為一種從骨髓、外周血和臍帶血中高得率分離單個(gè)核細(xì)胞的無(wú)菌密度梯度介質(zhì)已應(yīng)用了三十多年。與Ficoll-Paque PLUS不同的是，F(xiàn)icoll-Paque PREMIUM的生產(chǎn)是在嚴(yán)格控制環(huán)境下完成的, 生產(chǎn)條件符合ISO 13485:2003標(biāo)準(zhǔn)，GMP認(rèn)證和美國(guó)藥典的建議，可用于生產(chǎn)細(xì)胞治療相關(guān)產(chǎn)品。細(xì)胞毒性等級(jí)為0。有RSF文件。

膠原酶 I 型膠原酶從溶組織梭菌制備，用于細(xì)胞和組織的解離。

間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 Gibco MEM-α無(wú)酚紅基礎(chǔ)培養(yǎng)基可用于多種懸浮和貼壁的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括角化細(xì)胞、原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞和人黑色素瘤細(xì)胞。

Gibco MEM-α谷氨酰胺基礎(chǔ)培養(yǎng)基廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)以及DHFR陰性轉(zhuǎn)染細(xì)胞選擇。

參考文獻(xiàn)

1 Dolly Mushahary, et al. Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017

2 人類(lèi)間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)建設(shè)與管理規(guī)范，SZDB/Z 126-2015

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